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常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)
特点：同时具有识别切割和修饰活性；切割位点距离识别位点不定，可达数千个碱基之远；作用时需要ATP。典型酶种：EcoB、Ecok等。Type Ⅱ 特点：只具有识别切割的作用；识别序列多为短的回文序列（一般为4-8bp），酶切位点通常就是所识别序列，特异性切割；作用时需要Mg2+；分子克隆中最常用的一类限制酶。
酶切位点是DNA分子中的一个重要特征，指的是DNA双螺旋链上一段特定的碱基序列。以下是关于酶切位点的简介：定义与特性：酶切位点是一段特定的DNA碱基序列，能够被特定的限制性内切酶识别并切割。这种序列对于限制性内切酶来说具有高度的专一性，只有匹配的酶才能在其位置进行切割。
限制性核酸内切酶的识别序列是一段双链的DNA序列，应该在下边再写一列的。像这样：GAATTC CTTAAG 这是它的识别序列。一般在设计引物的时候，会在酶切位点前设置保护性碱基，保护性碱基根据限制酶的不同而改变，一般是四个，ATGC。
位置：一条单链DNA上可能有多个识别位点，但一个识别位点只有一个酶切位点。对称性：限制酶的识别位点大多数为回文对称结构，切割位点在 DNA 两条链一定是相对称的位置。
质粒上的切点就是限制性内切酶的切割位点。每一种限制性内切酶都识别特定的碱基序列，并有特定的切割位点，比如：限制性内切酶BamHI，识别序列：5 G^GATCC 3 ，切割位点是GA之间（已经标出）。
一般所说的酶切位点。就是限制性内切酶所能切开的DNA序列，基因工程中所用的限制性内切酶位点大多都是专一性的，只能识别某特定序列，并且在该序列的特定部位切开。酶切位点有些基因里面有，有些基因里面没有，不一定的。
关于pET32a载体构建后,双酶切鉴定不正确求助
一般来说融合蛋白不影响gus的检测，不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得，如果不做定位的的话，gus检测不是那么重要。可以把gus切下去（选用sacI位点）。pcr在基因组合转录组里面都能检测出来就认为目的基因正确表达了。要注意的是如果不融合的话别忘了CDS是要带终止密码子的。